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標準操作流程如下:
1. 儀器準備:
? 預熱分光光度計或酶標儀30分鐘以上,設置波長為405nm
? 準備離心機、移液器等必要設備
? 準備比色皿或96孔板
2. 試劑配制:
? 可能需要配制工作液,如將試劑一與試劑二按特定比例混合
? 配制后的試劑需2-8℃避光保存,建議一周內使用
3. 樣本處理:
? 血清樣本:室溫血液自然凝固30分鐘后,在4℃條件下1000×g離心15分鐘,取上清液
? 血漿樣本:將全血收集到含抗凝劑的管中(EDTA、檸檬酸鈉或肝素),混合20分鐘,在4℃條件下1000×g離心15分鐘,取上清液
? 樣本保存:上清液可于-20℃以下保存,但24小時內檢測可放入2-8℃儲存
4. 樣本測定(以96孔板為例):
5. 反應與檢測:
? 充分混勻各孔液體
? 37℃水浴反應30-60分鐘
? 使用分光光度計或酶標儀在405nm波長處測定各管吸光度,分別記為A空白、A標準和A樣本
6. 數據計算:
? 繪制標準曲線:以標準液濃度為橫坐標,ΔA標準為縱坐標
? 計算樣本鈉濃度:根據A樣本值在標準曲線上確定對應的鈉濃度
7. 質量控制:
? 每次實驗應設置空白對照、標準曲線和重復樣本
? 確保空白吸光度≤0.20,空白吸光度變化率△A/min<0.08
? 線性范圍應為0-180mmol/L(r≥0.990),批內精密度CV≤10%
試劑名稱 | 空白管 | 標準管 | 樣本管 |
試劑一(μL) | 200 | 200 | 200 |
試劑二(μL) | - | - | - |
標準液(μL) | - | 20 | - |
樣本上清液(μL) | - | - | 20 |
蒸餾水(μL) | 20 | - | - |
β-半乳糖苷酶(μL) | 20 | 20 | 20 |
ONPG底物(μL) | 20 | 20 | 20 |